FAST Crispr按需

为了将CRISPR-Cas9介导的DNA切割的时间分辨率提高到小时尺度，已经做了大量的努力。刘等人。开发了一个Cas9系统，实现了第二时间尺度的基因组编辑操作(见Medhi和Jasin的透视图)。部分引导RNA被化学囚禁，使Cas9-引导RNA复合物能够在没有切割的情况下结合在特定的基因组位点上，直到被光激活。这个快速的CRISPR系统实现了高时间分辨率的基因组编辑，使得研究DNA修复过程的早期分子事件成为可能。该系统还具有短时间尺度下的高空间分辨率，允许编辑一个基因组等位基因，而另一个不受干扰。科学，本期第[1265]页[1]；另见第[1180]页[2]CRISPR-CAS系统为可编程基因组编辑提供了通用工具。在这里，我们开发了一种笼式RNA策略，允许Cas9与DNA结合，但在光诱导激活之前不会切割。这种方法被称为非常快的CRISPR(VfCRISPR)，在亚微米和秒尺度上产生双链断裂(DSB)。同步切割改善了DNA修复的动力学分析，显示细胞在几分钟内对Cas9诱导的DSB有反应，并在DNA连接后保留Mre11。DNA损伤后H2AX的磷酸化速度超过每分钟100千碱基，最高可达30兆碱基。利用单细胞荧光成像，我们表征了多个周期的53BP1修复灶的形成和溶解，第一个周期比随后的周期需要更长的时间，其持续时间受修复抑制的调节。成像引导的亚细胞Cas9激活进一步促进了单等位基因分辨率的基因组操作。vfCRISPR可以在空间、时间和基因组坐标上进行高分辨率的DNA修复研究。[1]：/lookup/doi/10.1126/cience.aay8204[2]：/lookup/doi/10.1126/cience.abc3997